試劑盒中CIB緩沖液分離細(xì)胞質(zhì)的蛋白，MIB緩沖液分離完整的膜和細(xì)胞器的蛋白，CyNIB緩沖液分離細(xì)胞核和細(xì)胞骨架的蛋白。試劑盒包含足夠的緩沖液，能進(jìn)行20次測(cè)定。

那么，分離到的各組分在用于SDS-PAGE和WB分析其他指標(biāo)之前，可先測(cè)定組分分離效率。這就用到了我們的百奧創(chuàng)新檢測(cè)試劑盒Cell Fractionation Antibody Sampler Kit #11843。其中#8727 MEK1/2(D1A5) Rabbit mAb用于檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)的蛋白（Cyto），#5318AIF(D3902)XP® Rabbit mAb用于檢測(cè)完整的膜和細(xì)胞器的蛋白（Mem），#4499Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb和#5741 Vimentin(D21H3) XP®Rabbit mAb可分別用于檢測(cè)細(xì)胞核和細(xì)胞骨架的蛋白（Nuc）。

全細(xì)胞裂解物（WCL）代表總蛋白質(zhì)。該圖顯示細(xì)胞質(zhì)的蛋白（Cyto），完整的膜和細(xì)胞器的蛋白（Mem）和細(xì)胞核和細(xì)胞骨架的蛋白（Nuc）分離干凈且效率高。

zui后，百奧創(chuàng)新小編給大家總結(jié)了實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)：

1.除了添加和超聲 CyNIB buffer 外，其他所有步驟都需要在冰上或 4℃ 操作。

2.該試劑盒可用于貼壁或懸浮的細(xì)胞。

3..1X 蛋白酶抑制劑 (#5871) (每500μl buffer 中加入5μl 100x 的蛋白酶抑制劑，試劑盒包含) 和 1 mM 新鮮的 PMSF (#8553) (每500μl buffer 中加入2.5 μl 200 mM 的 PMSF, 試劑盒不包含) 需現(xiàn)配現(xiàn)用。

4.Buffer中已含磷酸酶抑制劑，無(wú)需額外添加。

5.步驟D和E中所給體系，是根據(jù)10cm 培養(yǎng)皿中90%融合度的HeLa細(xì)胞（——5x106個(gè)細(xì)胞）得來(lái)的。

6.如果 CyNIB buffer 溶解后有絮狀物，請(qǐng)?jiān)?7℃水浴中孵育*溶解。

7.注意：保存各組分時(shí)需十分小心不要吸到沉淀，以免污染。

8.所有裂解液短期保存（1月內(nèi)）需放 -20°C，長(zhǎng)期保存（1月以上）則需放-80°C 。

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